本試劑盒只能用於科學研究╃◕·▩╃，不得用於醫學診斷

透明質酸酶（HAase）ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

上海瑞番生物科技有限公司試劑盒採用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）╃│₪│。往預先包被透明質酸酶（HAase）抗體的包被微孔中╃◕·▩╃，依次加入標本│··✘•、標準品│··✘•、HRP標記的檢測抗體╃◕·▩╃，經過溫育並洗滌╃│₪│。用底物TMB顯色╃◕·▩╃，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色╃◕·▩╃，並在酸的作用下轉化成最終的黃色╃│₪│。顏色的深淺和樣品中的透明質酸酶（HAase）呈正相關╃│₪│。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值）╃◕·▩╃，計算樣品活性╃│₪│。

樣品收集│··✘•、處理及儲存方法

1.  血清↟✘：使用不含熱原和內毒素的試管╃◕·▩╃，操作過程中避免任何細胞刺激╃◕·▩╃，收集血液後╃◕·▩╃，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離╃│₪│。

2.  血漿↟✘：EDTA│··✘•、檸檬酸鹽或肝素抗凝╃│₪│。3000轉離心30分鐘取上清╃│₪│。

3.  細胞上清液↟✘：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物╃│₪│。

4.  組織勻漿↟✘：將組織加入適量生理鹽水搗碎╃│₪│。3000轉離心10分鐘取上清╃│₪│。

5.  儲存↟✘：如果樣本收集後不及時檢測╃◕·▩╃，請按一次用量分裝╃◕·▩╃，凍存於-20℃╃◕·▩╃，避免反覆凍融╃◕·▩╃，在室溫下解凍並確保樣品均勻地充分解凍╃│₪│。

自備物品

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭↟✘：0.5-10uL│··✘•、2-20uL│··✘•、20-200uL│··✘•、200-1000uL

3. 37℃恆溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒儲存在2-8℃╃◕·▩╃，使用前室溫平衡20分鐘╃│₪│。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶╃◕·▩╃，這屬於正常現象╃◕·▩╃，水浴加熱使結晶溶解後再使用╃│₪│。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中╃◕·▩╃，密封（低溫乾燥）儲存╃│₪│。

3.  濃度為0的S0號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明書操作時樣本已經稀釋5倍╃◕·▩╃，最終結果乘以5才是樣本實際濃度╃│₪│。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間│··✘•、加液量及順序進行溫育操作╃│₪│。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻╃│₪│。

試劑盒組成

注↟✘：標準品（S0-S5）濃度依次為↟✘：請聯絡我公司客服╃◕·▩╃，索取最新相關資料

試劑的準備

 20×洗滌緩衝液的稀釋↟✘：蒸餾水按1↟✘：20稀釋╃◕·▩╃，即1份的20×洗滌緩衝液加19份的蒸餾水╃│₪│。

洗板方法

1.  手工洗板↟✘：甩盡孔內液體╃◕·▩╃，每孔加滿洗滌液╃◕·▩╃，靜置1min後甩盡孔內液體╃◕·▩╃，在吸水紙上拍幹╃◕·▩╃，如此洗板5次╃│₪│。

2.  自動洗板機↟✘：每孔注入洗液350μL╃◕·▩╃，浸泡1min╃◕·▩╃，洗板5次╃│₪│。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min後的鋁箔袋中取出所需板條╃◕·▩╃，剩餘板條用自封袋密封放回4℃╃│₪│。

2.  設定標準品孔和樣本孔╃◕·▩╃，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.  樣本孔先加待測樣本10μL╃◕·▩╃，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加╃│₪│。

4.  除空白孔外╃◕·▩╃，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL╃◕·▩╃，用封板膜封住反應孔╃◕·▩╃，37℃水浴鍋或恆溫箱溫育60min╃│₪│。

5.  棄去液體╃◕·▩╃，吸水紙上拍幹╃◕·▩╃，每孔加滿洗滌液╃◕·▩╃，靜置1min╃◕·▩╃，甩去洗滌液╃◕·▩╃，吸水紙上拍幹╃◕·▩╃，如此重複洗板5次（也可用洗板機洗板）╃│₪│。

6.  每孔加入底物A│··✘•、B各50μL╃◕·▩╃，37℃避光孵育15min╃│₪│。

7.  每孔加入終止液50μL╃◕·▩╃，15min內╃◕·▩╃，在450nm波長處測定各孔的OD值╃│₪│。

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