包被抗體（或抗原）的挑選•☁：將抗體（或抗原）吸附在固相載體外表時₪╃☁▩，請求純度要好,吸附時一般請求PH在9.0～9.6之間│╃。吸附溫度₪╃☁▩，時刻及其蛋白量也有必定影響,一般多選用4℃18～24小時│╃。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌效果₪╃☁▩，應留意防護│╃。其方式可所以凹孔平板◕│••▩、試管◕│••▩、珠粒等│╃。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板│╃。不論何種載體₪╃☁▩，在運用前均可進行篩選•☁：用等量抗原包被₪╃☁▩，在同一實驗條件下進行反響₪╃☁▩，調查其顯色反響是不是均一性₪╃☁▩，據此判明其吸附效能是不是傑出│╃。正式實驗時₪╃☁▩，應別離以陽性對照與陰性對照操控實驗條件₪╃☁▩，待檢樣品應作一式二份₪╃☁▩，以確保實驗成果的性│╃。

　　在ELISA中₪╃☁▩，進行各項實驗條件的挑選是很主要的₪╃☁▩，其間包含:

　　有條件者應運用不致癌◕│••▩、靈敏度高的供氫體₪╃☁▩，如TMB和ABTS是現在較為滿足的供氫體│╃。底物效果一段時刻後₪╃☁▩，應參加強酸或強鹼以停止反響│╃。一般底物效果時刻₪╃☁▩，以10-30分鐘為宜│╃。底物運用液必須新鮮製造₪╃☁▩，尤其是H2O2在臨用前參加│╃。然後再固定其它條件或採納“方陣法”（包被物◕│••▩、待檢樣品的參閱品及酶符號抗體別離為不一樣的稀釋度）在正式實驗體系裡地滴定其作業濃度│╃。有時本底較高₪╃☁▩，闡明有非特異性反響₪╃☁▩，可選用羊血清◕│••▩、兔血清或BSA等封閉│╃。酶的底物及供氫體的挑選•☁：對供氫體的挑選請求是價廉◕│••▩、安全◕│••▩、有明顯地顯色反響₪╃☁▩，而自身無色│╃。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定•☁：即用不一樣的蛋白質濃度（0.1◕│••▩、1.0和10μg/ml等）進行包被後₪╃☁▩，在其它實驗條件相同時₪╃☁▩，調查陽性標本的OD值│╃。挑選OD值zui大而蛋白量起碼的濃度│╃。關於多數蛋白質來說一般為1～10μg/ml│╃。ELISA試劑盒實驗酶符號抗體作業濃度的挑選•☁：首先用直接ELISA法進行開始效價的滴定（見酶符號抗體部份）│╃。